GRAB探针常见问题

Q1: 都有什么神经递质的GRAB荧光探针，以及颜色（荧光）是什么？

A1: 目前实验室已经发表了第一代绿色荧光（可以用GFP或GCaMP通道成像）的多巴胺（GRABDA1h和GRABDA1m, Sun et al., 2018, Cell）、乙酰胆碱（GACh1.0和GACh2.0, Jing et al., 2018, Nature Biotechnology）、和去甲肾上腺素（GRABNE1h和GRABNE1m, Feng et al., 2019, Neuron）探针；除此之外，我们实验室还继续优化拥有更大信噪比的第二代绿色荧光探针、新的红色荧光（可以用RFP，如mcherry通道成像）探针及其它神经递质探针。

Q2: GRAB探针命名中h/m/l/mut分别代表什么意思？数字代表什么意思？

A2: 探针名称中的h/m/l分别代表探针对相应配体亲和力的高/中/低；其中大部分GRAB探针都有对递质不敏感的突变型对照（探针名称中标注mut），与GRAB探针搭配使用可用于确认检测信号的特异性。名称中数字代表的是探针的版本，版本越高探针信噪比越好。

Q3: GRAB探针如何使用？

A3: GRAB探针是基因编码的神经递质探针，与其它的基因编码探针（如GCaMP等）类似，可以表达在特定的细胞上，实现在培养的细胞水平、脑片组织水平、活体模式动物水平（果蝇、斑马鱼、小鼠、大鼠、猴等）检测胞外神经递质的动态变化。仪器设备的选择上，GRAB探针在普通落射荧光显微镜、激光共聚焦荧光显微镜、双光子显微镜及光纤记录等系统上都有良好的表现。

Q4: 如何获取这些GRAB探针？

Q5: 可否分享一下具体的GRAB探针病毒和转基因果蝇清单？

A5: 实验室已有的GRAB探针病毒列表见Excel表格（包括病毒类型、血清型、启动子、探针版本、是否发表等信息）；实验室现有的转基因果蝇清单也分享在Excel表格中，如有需要，可以邮件联系我们，联系邮箱：yulonglilab2018@gmail.com。

Q6: 探针能够长时间在体内表达吗？

A6: 可以的。目前的测试中，GRAB探针在小鼠脑中表达3-6个月后仍然能够记录到很好的信号。

Q7: 探针是不是可以检测神经元的兴奋性？

A7: 不可以。GRAB神经递质荧光探针的荧光强度变化只表明相应神经递质的动态变化，与细胞的兴奋程度并没有直接关联，如需检测细胞的兴奋程度需要别的手段。

Q8: GRAB探针是否会偶联GPCR下游的信号？

A8: 已测试的GRAB探针不会或很少偶联相应GPCR下游的G蛋白，也不会因为偶联β-arrestin而引起探针的内吞。

Q9: GRAB探针的表达会不会对影响细胞的正常生理活动？

A9: 已测试的GRAB探针不会或很小程度地影响细胞正常的生理活动。例如： 1） 膜片钳记录显示，表达了ACh2.0的CA1神经元与邻近的未表达探针的神经元的静息膜电位、输入电阻、膜时间常数及平均动作电位发放频率没有明显区别。并且ACh2.0的表达并没有造成AMPA、NMDA、和GABA能的反应, 及成对脉冲刺激促进的AMPA反应的改变。在CA3神经元上的实验发现，由乙酰胆碱引起的电流的幅度、潜伏期和信噪比在ACh2.0表达的神经元及未表达的神经元上没有明显差别。在使用AAV进行长时间表达的实验中，实验数据表明，有ACh2.0表达的神经元由高钾引起的钙信号以及前面提到的指标上也与未表达的神经元没有明显差别（Jing et al., 2018, Nature Biotechnology）。 2） 在小鼠海马脑片及斑马鱼幼鱼上，我们观察到NE1m的表达对钙信号没有明显影响(Feng et al., 2019, Neuron)。在果蝇上，5-HT1.0与jRCaMP1a共表达的实验中发现，5-HT1.0的表达也对钙信号没有明显影响（Wan et al., 2020, bioRxiv）。

Q10: 是否可以用在病人上？

A10: 目前还不能。我们的探针目前只在离体培养细胞、组织、类器官及活体实验动物上使用，不能用于临床。